Fluorescent In Situ Hybridization (FISH) Assay
Introducción a la Hibridación Fluorescente In Situ (FISH)
¿Qué es FISH?
- La hibridación fluorescente in situ (FISH) es una técnica genética molecular que utiliza sondas fluorescentes para unirse a partes específicas del cromosoma con alta complementariedad de secuencia.
- El ADN está compuesto por dos cadenas en forma de doble hélice, donde las bases se unen entre sí, permitiendo que secuencias complementarias se hibriden.
Proceso de Hibridación
- FISH aprovecha la capacidad de una cadena de ADN para hibridar específicamente con otra. Utiliza sondas pequeñas de ADN etiquetadas con fluorescencia que son complementarias a regiones específicas del cromosoma.
- Si hay una pequeña deleción en la región complementaria a la sonda, esta no podrá hibridar; si hay duplicación, más sonda podrá hibridar. La elección correcta de la sonda es crucial para el éxito del procedimiento.
Tipos y Características de Sondas
- Existen diferentes tipos de sondas:
- Sondas de ADN bicatenario (dsDNA), estables y fáciles de obtener.
- Sondas de ADN monocatenario (ssDNA), más específicas y resistentes.
- Sondas para ARN, que tienen mayor estabilidad térmica y mejor penetración en tejidos.
- Las sondas pueden estar etiquetadas con isótopos radiactivos o no radiactivos como biotina y colorantes fluorescentes.
Pasos del Procedimiento FISH
- Los pasos principales en el proceso FISH incluyen:
- Preparación de las sondas fluorescentes.
- Desnaturalización del ADN objetivo y la sonda.
- Hibridación entre la sonda y el objetivo.
- Detección final.
Aplicaciones y Consideraciones Finales
- Las muestras FISH se dividen en dos categorías: suspensiones celulares fijas y muestras de tejido embebidas en parafina. La fijación adecuada es crítica para el éxito del procedimiento.