Capitulo III HPLC Inyectores bombas video 10

Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento: Equipamiento y Funcionamiento

Introducción a la Cromatografía Líquida

• Se inicia con una descripción del equipamiento utilizado en la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), enfocándose en el funcionamiento y aplicación de bombas e inyectores.

• La cromatografía líquida clásica ha sido reemplazada por HPLC, que es más poderosa y analíticamente útil para separar compuestos no volátiles.

Componentes del Sistema HPLC

• El sistema HPLC incluye un reservorio de solvente, válvula de inyección, columna de alta presión, detector y ordenador para controlar el equipo.

• Muchos equipos modernos también incorporan un horno para controlar la temperatura de la columna.

Fase Móvil y Preparación del Solvente

• El reservorio contiene uno o varios solventes; a diferencia de la cromatografía gaseosa, los solventes son líquidos almacenados en botellas.

• Es crucial evitar partículas y burbujas en el sistema; se utilizan filtros y métodos para desgasificar los solventes antes de su uso.

Importancia de las Bombas en HPLC

• Las bombas son esenciales para impulsar el solvente hacia el inyector y columna; su calidad se mide por la capacidad de generar un flujo constante.

• Un caudal fluctuante puede causar ruido en el detector, afectando la visualización de señales débiles. La precisión ideal debe ser menor al 0.5%.

Tipos de Bombas Utilizadas

• Existen diferentes tipos de bombas: desplazamiento positivo (sin pulsos), recíprocas (pulsantes), y formadoras de gradientes (cambios durante análisis).

Overview of High-Pressure Ingredient Forming Pumps

Binary Pump Systems

• Cuaternarias pumps operate with two parallel pumps drawing from distinct reservoirs, hence termed "binary" systems.

Socratic Pump Functionality

• The Socratic pump shares operational principles with the cuaternary pump but features a single solvent channel, limiting phase composition modification during runs due to the absence of a proportional valve.

Liquid Chromatography Techniques

• Gradient elution chromatography is highlighted as an effective method for separating compounds with significantly different retention times in solution, enhancing peak resolution and minimizing peak broadening.

Manual Injection Systems

• A typical manual injection system consists of a stainless steel ring with six connections; it includes a movable Teflon cone that facilitates direct flow from the pump to the column while integrating sample injection into the mobile phase.

Sample Injection Limitations

• Samples can be injected manually at pressures up to 6,000 psi using syringes; however, fixed sample sizes necessitate changing the loop to vary injected amounts.

Advancements in Automatic Sampling Systems

Features of Automatic Injectors

• Modern automatic sampling valves streamline operations by taking samples from an automated counter without requiring manual intervention; they integrate seamlessly into the mobile phase circuit.

Capacity and Versatility

• These injectors can accommodate up to 96 vials (2 mL each), allowing variable injection volumes ranging from 1 µL to over 2 mL. Some models also perform basic sample preparation tasks like dilution or derivatization.

Operational Efficiency Requirements