Electroforesis de ADN: Conceptos Básicos

Electroforesis y su Utilidad en el Análisis de Ácidos Nucleicos

Definición y Principios Básicos

• La electroforesis se define como el movimiento de partículas bajo un campo eléctrico, utilizado para separar moléculas según su tamaño.

• En el caso del ADN, los grupos fosfato confieren una carga negativa a la molécula, lo que influye en su movilidad electroforética.

Tipos de Electroforesis

Electroforesis en Gel Agarosa

• Este método utiliza geles de agarosa para separar cadenas de ADN pequeñas (hasta kilobases) y se corre horizontalmente con botones de corrida como TAE o TVE.

Electroforesis en Gel de Poliacrilamida

• Principalmente utilizada para proteínas, también separa ácidos nucleicos más pequeños con mayor resolución; se forma mediante polimerización iniciada por amonio.

• Los geles son verticales para evitar contacto con oxígeno, lo que podría inhibir la polimerización.

Comparación y Análisis

• Se utilizan estándares con fragmentos conocidos para comparar las bandas obtenidas tras la separación electroforética. Esto es común en ensayos de genotipificación.

• El bromuro de etidio se usa para teñir el ADN, permitiendo visualizar las bandas bajo luz ultravioleta.

Métodos Avanzados

Electroforesis de Campos Pulsados

• Ideal para trabajar con fragmentos grandes (megabases), cambia el voltaje en tres direcciones diferentes, mejorando la definición de cadenas largas frente a cortas.

• Es útil en infectología al analizar patrones de restricción del genoma bacteriano y sus mutaciones.

Electroforesis en Gradiente Desnaturalizante

• Utiliza un gel con gradiente de urea y formamida que desnaturaliza cadenas de ADN; menos migración ocurre cuanto más desnaturalizada está una cadena.

• Permite observar mutaciones o genes únicos debido a cambios mínimos en la secuencia del ADN que afectan sus propiedades físico-químicas.

Electroforesis Capilar