Técnica ELISA [Teoría y Práctica]

Introducción a la técnica ELISA

Resumen de la sección: En esta sección, se introduce la técnica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), que se utiliza para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Se explican los principios básicos del ensayo ELISA y su aplicación en el diagnóstico de enfermedades infecciosas.

Teoría y práctica de la técnica ELISA

• Los ensayos de ELISA están diseñados para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas.

• El ensayo ELISA es un ensayo inmuno enzimático utilizado para determinar anticuerpos específicos o antígenos en una muestra.

• El principio básico del ensayo incluye la inmovilización del antígeno en una fase sólida y la unión de los anticuerpos específicos presentes en la muestra al antígeno inmovilizado.

• En un ensayo directo, se revela el complejo antígeno-anticuerpo utilizando un anticuerpo específico acoplado a una enzima. En un ensayo indirecto, se utiliza un segundo anticuerpo acoplado a una enzima para amplificar la señal.

• La técnica ELISA se utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas mediante la detección de los anticuerpos generados por el cuerpo humano para combatirlas.

• También se puede utilizar la técnica ELISA para detectar la presencia de antígenos específicos, como proteínas, utilizando un ensayo de tipo sandwich.

Procedimiento práctico del ensayo ELISA

Resumen de la sección: En esta sección, se describe el procedimiento práctico del ensayo ELISA y se explican los pasos clave involucrados en el ensayo directo para determinar la presencia o ausencia de un anticuerpo específico.

Pasos del ensayo ELISA directo

• El ensayo directo para determinar anticuerpos específicos consta de tres capas: antígeno, anticuerpo y conjugado.

• El primer paso es el "coaching", donde se absorbe el antígeno a una fase sólida (pocillos de una placa).

• El segundo paso es el "bloqueo", donde se agrega una proteína irrelevante para evitar interacciones no específicas entre los anticuerpos y la superficie de la placa.

• A continuación, se realiza la "reacción antígeno-anticuerpo" al poner en contacto la muestra a estudiar con el antígeno inmovilizado en los pocillos.

• Después de incubar durante una hora a 37 grados, se lava cada posición para eliminar cualquier material no unido.

Optimización y aplicaciones del ensayo ELISA

Resumen de la sección: En esta sección, se menciona la importancia de optimizar cada paso del ensayo ELISA y se destacan algunas aplicaciones comunes de esta técnica en el diagnóstico de enfermedades.

Optimización del ensayo ELISA

• No se proporciona información relevante en esta parte del video.

Aplicaciones del ensayo ELISA

• El ensayo ELISA se utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección de anticuerpos anti-VIH en el plasma sanguíneo.

• También se puede utilizar para detectar la presencia de antígenos específicos, como proteínas, en muestras de sangre o saliva.

• Los ensayos ELISA tienen versiones que se pueden realizar caseramente para detectar hormonas o antígenos propios del virus, como en el caso del diagnóstico de embarazo o COVID-19.

Conclusión y laboratorio virtual

Resumen de la sección: En esta sección final, se menciona que es importante elegir un protocolo adecuado según los requisitos particulares y se invita a ver la parte práctica en un laboratorio virtual.

Elección del protocolo y laboratorio virtual

• Dado que hay variantes significativas entre distintos protocolos, es importante elegir aquel que mejor se ajuste a los requisitos particulares.

• Se invita a ver la parte práctica en un laboratorio virtual para comprender mejor cómo realizar el ensayo ELISA.

Enzima peroxidasa y reacción con anticuerpos

Resumen de la sección: En esta sección se explica cómo la enzima peroxidasa reacciona con los anticuerpos que se desean detectar, los cuales están unidos al antígeno inmovilizado. Se describe el proceso de incubación de los pocillos de la placa con una solución de anticuerpos conjugados durante una hora a 37 grados. Luego, se realiza el lavado de cada pocillo.

• La enzima peroxidasa reacciona con los anticuerpos unidos al antígeno inmovilizado.

• Se incuban los pocillos con una solución de anticuerpos conjugados durante una hora a 37 grados.

• Se realiza el lavado de cada pocillo después de la incubación.

Revelado y medición de densidad óptica

Resumen de la sección: En esta sección se explica el proceso de revelado, donde la enzima conjuga del anticuerpo reacciona con un sustrato incoloro para transformarlo en un producto coloreado. Luego, se mide su densidad óptica utilizando un espectrofotómetro.

• El revelado implica que la enzima conjuga del anticuerpo reaccione con un sustrato incoloro para producir un producto coloreado.

• La densidad óptica del producto coloreado es medida utilizando un espectrofotómetro.

Controles necesarios

Resumen de la sección: En esta sección se mencionan los controles necesarios para realizar la prueba de detección de anticuerpos.

• Se deben correr al menos los siguientes controles:

• Controles negativos con suero en el que no hay anticuerpo.

• Controles positivos con suero que contiene el anticuerpo.

• Blancos de lectura en los que no se pegó el antígeno.

Control positivo y blancos de lectura

Resumen de la sección: En esta sección se explica la importancia del control positivo y los blancos de lectura en la prueba de detección de anticuerpos.

• El control positivo consiste en utilizar suero que contiene el anticuerpo y correrlo en un pocillo con antígeno para verificar si la técnica funciona correctamente.

• Los blancos de lectura son pocillos en los que no se pegó el antígeno y representan la integración de las fuentes específicas del ensayo.

Control negativo y conversión espontánea

Resumen de la sección: En esta sección se explica el control negativo y la conversión espontánea del cromógeno o fotosensible.

• El control negativo utiliza un suero sin anticuerpos, reemplazando al suero positivo, y se realiza en pocillos sin antígeno.

• La conversión espontánea del cromógeno o fotosensible ocurre en los pocillos sin antígeno donde se agregan los mismos reactivos utilizados en el resto de la placa.

Análisis cualitativo de los resultados

Resumen de la sección: En esta sección se explica cómo realizar un análisis cualitativo de los resultados observando la coloración de cada posición en la placa.

• Para el análisis cualitativo, basta con observar la coloración o falta de coloración en cada posición.

• La presencia de coloración indica que el suero sembrado en el pocillo contenía anticuerpos específicos contra el antígeno inmovilizado.

Análisis cuantitativo y curvas de dilución

Resumen de la sección: En esta sección se explica cómo realizar un análisis cuantitativo utilizando curvas de dilución con suero positivo de concentración conocida.

• Para realizar un análisis cuantitativo, pueden realizarse curvas con diluciones seriadas del suero positivo.

• Se grafica el logaritmo del factor de dilución versus la densidad óptica obtenida para inferir las concentraciones de anticuerpos presentes en las muestras incógnitas.

Kits comerciales para investigación y diagnóstico

Resumen de la sección: En esta sección se menciona que existen muchos kits comerciales disponibles específicamente para la investigación y diagnóstico de enfermedades.

• En el mercado existen muchos kits comerciales preparados específicamente para la investigación y diagnóstico de enfermedades determinadas.

Invitación a dar like, compartir y suscribirse

Resumen de la sección: Al final del video, se invita a los espectadores a dar like, compartir y suscribirse al canal para obtener más información. También se menciona la posibilidad de convertirse en mecenas para acceder a contenido exclusivo y otros beneficios.

• Se invita a los espectadores a dar like, compartir y suscribirse al canal.

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